Bài giảng Điện di

Điện di là gì? Hiện tượng các phân tử dịch chuyển trên giá thể trong môi trường có dòng điện chạy qua. Giá thể có thể là: Giấy Gel (acrylamide, agar, agarose, tinh bột…) Kỹ thuật điện di cho phép tách được các tiểu phần có khối lượng phân tử khác nhau, dùng cho các nghiên cứu, phân tích những tiểu phần đó. Nguyên tắc điện di Tốc độ dịch chuyển khác nhau theo khối lượng phân tử của các tiểu phần. Điện di một chiều: (-) (+) Các tiểu phần có thể tích điện (-) hoặc (+) cho nên phải làm cho tất cả các tiểu phần tích điện (-) bằng cách phủ lên các tiểu phần chất SDS (Soudium dedoxyl sunphate) Thiết bị và vật liệu điện di Máy điện di Bộ nguồn điện Kỹ thuật chế gel điện di bao gồm các bước: (1) Lắp ráp khuôn gel (2) tạo gel (3) đổ gel Điện di DNA Đặc điểm cấu trúc của ADN DNA được cấu tạo từ các nucleotide DNA mạch kép có các cặp base liên kết với nhau bằng các cầu nối hydrro Để tính kích thước phân tử DNA người ta dùng đơn vị bp (base pair)- cặp base, cặp nucleotide. 1 Kb (kilo base) = 1000 bp Tách chiết ADN Tách chiết ADN từ mô sống Kiểm tra bằng quang phổ hấp thụ ở 260 nm Phân tích diện di để khẳng định dung dịch chứa ADN Chế tạo bản gel agarose Bột agarose được đun cùng với dung dịch đệm chứa SDS 0,8%; 1,0%; 1,5%. Đổ bản gel Lắp ráp vào máy điện di Chạy điện di Chụp ảnh để phân tích Preparation of an agarose gel Hình ảnh điện di ADN Hình ảnh điện di ADN Điện di Protein Phương pháp Cấu trúc và đặc tính của protein Cấu tạo từ khoảng 20 loại acid amin Cấu trúc bậc I, II, III, IV. Bậc IV gồm nhiều chuỗi polypeptid Chuỗi polypeptid có thể tích điện (+) hoặc (-) Quy trình điện di protein Biến tính protein Diện di ở thế hiệu khác nhau Chụp anh và phân tích kết qua thành phần điện di protein Chiết protein Chiết protein Protein chiết từ mẫu tươi bằng dung dịch đệm ở 40C (NaCl, H2O, Tris.HCl…) trong 24h. Ly tâm thu dịch chứa protein. Dịch chứa protein được bảo quản ở 200C. Tạo bản gel, tra mẫu và chạy điện di Chế gel (gel cô và gel tách) Đổ gel gồm 2 lớp. Đưa bản gel vào bộ phận điện di Tra mẫu vào giếng Chạy điện di Chụp ảnh để phân tích Hinh anh phổ điện di protein chiết bằng nước cất của các dòng đậu xanh đột biến (M. marker; 1. Mỡ giống gốc; 2. MX10; 3. MXU21; 4. MXE01; 5. MX1608, 6. MX1103; 7. Tiêu giống gốc; 8. TXU21; 9. TX16012. ( : bang mất đi : bang xuất hiện ) (Chu Hoàng Mậu,2000) Hình ảnh điện di protein ở lúa Hình ảnh điện di protein ở lạc